Bidhaa
Seti ya Utambuzi ya Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR ya 2019-nCoV
Matumizi yanayotarajiwa
Seti hii hutumika kutambua ubora wa virusi vipya vya corona (2019-nCoV) kwa kutumia usufi wa koo, usufi wa nasopharyngeal, kiowevu cha bronchoalveolar lavage, sputum. ushahidi wa uchunguzi wa kimatibabu na matibabu.Uchambuzi wa kina wa hali hiyo unapendekezwa pamoja na udhihirisho wa kliniki wa mgonjwa na vipimo vingine vya maabara.
Kanuni ya ukaguzi
Seti hiyo inategemea teknolojia ya hatua moja ya RT- PCR.Kwa kweli, jeni mpya za 2019 za coronavirus (2019-nCoV) ORF1ab na N zilichaguliwa kama maeneo yanayolengwa ya ukuzaji.Vianzilishi mahususi na vichunguzi vya umeme (vichunguzi vya jeni vya N vimewekwa lebo ya FAM na vichunguzi vya ORF1ab vina lebo ya HEX) vimeundwa kugundua RNA ya aina mpya ya 2019 katika sampuli.Seti hii pia inajumuisha mfumo wa ugunduzi wa udhibiti wa ndani wa ndani (kichunguzi cha jeni cha udhibiti wa ndani kilichoandikwa CY5) ili kufuatilia mchakato wa ukusanyaji wa sampuli, ukuzaji wa RNA na PCR, na hivyo kupunguza matokeo hasi ya uwongo.
Vipengele kuu
| Vipengele | Kiasi(48T/Kit） |
| Suluhisho la majibu ya RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab,N Gene,RnaseP Gene) | 864µl |
| Udhibiti hasi | 1500µl |
| Udhibiti chanya wa nCOV (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
Vitendanishi mwenyewe: uchimbaji wa RNA au vitendanishi vya utakaso.Udhibiti hasi/chanya: Udhibiti chanya ni RNA iliyo na kipande kinacholengwa, ilhali udhibiti hasi ni maji yasiyo na asidi ya nuklei.Wakati wa matumizi, wanapaswa kushiriki katika uchimbaji na wanapaswa kuchukuliwa kuwa kuambukiza.Yanapaswa kushughulikiwa na kutupwa kwa mujibu wa kanuni husika.
Jeni ya kumbukumbu ya ndani ni jeni ya RnaseP ya binadamu.
Masharti ya kuhifadhi na tarehe ya kumalizika muda wake
-20±5℃,epuka kugandisha mara kwa mara na kuyeyusha zaidi ya mara 5, halali kwa miezi 6.
Chombo kinachotumika
Na FAM / HEX / CY5 na ala nyingine ya njia nyingi za umeme za PCR.
Mahitaji ya sampuli
1.Aina za vielelezo vinavyotumika: usufi wa koo, usufi wa nasopharyngeal, maji ya lavage ya bronchoalveolar, sputum.
2. Mkusanyiko wa sampuli (mbinu ya aseptic)
Usuvi wa koromeo: Futa tonsils na ukuta wa nyuma wa koromeo kwa usufi mbili kwa wakati mmoja, kisha chovya kichwa cha usufi kwenye bomba la majaribio lenye suluhu ya sampuli.
Kohozi: Baada ya mgonjwa kupata kikohozi kirefu, kusanya sputum iliyokohoa kwenye bomba la kupima skrubu lenye suluhu ya sampuli;giligili ya lavage ya bronchoalveolar: Sampuli na wataalamu wa matibabu.3.Uhifadhi na usafirishaji wa sampuli
Sampuli za kutengwa kwa virusi na upimaji wa RNA zinapaswa kupimwa haraka iwezekanavyo.Sampuli zinazoweza kugunduliwa ndani ya masaa 24 zinaweza kuhifadhiwa kwa 4℃;zile ambazo haziwezi kugunduliwa ndani ya 24
saa zinapaswa kuhifadhiwa kwa -70 ℃ au chini (ikiwa hakuna hali ya kuhifadhi ya -70 ℃, zinapaswa kuwa
kuhifadhiwa kwa muda kwenye -20 ℃jokofu).Sampuli zinapaswa kuzuia kufungia mara kwa mara na kuyeyuka wakati wa usafirishaji.Sampuli zipelekwe kwenye maabara haraka iwezekanavyo baada ya kukusanywa.Ikiwa sampuli zinahitajika kusafirishwa kwa umbali mrefu, uhifadhi wa barafu kavu unapendekezwa.
Mbinu za Mtihani
1 Usindikaji wa sampuli na uchimbaji wa RNA (sehemu ya usindikaji ya sampuli)
Inashauriwa kuchukua 200μl ya sampuli ya kioevu kwa uchimbaji wa RNA.Kwa hatua zinazohusiana za uchimbaji, rejelea maagizo ya vifaa vya uchimbaji vya RNA vya kibiashara.Wote hasi na hasi
vidhibiti katika seti hii vilihusika katika uchimbaji.
2 Maandalizi ya kitendanishi cha PCR (sehemu ya kuandaa kitendanishi)
2.1 Ondoa vipengele vyote kutoka kwenye kit na kuyeyuka na kuchanganya kwenye joto la kawaida.Centrifuge saa 8,000 rpm kwa sekunde chache kabla ya matumizi;kuhesabu kiasi kinachohitajika cha vitendanishi, na mfumo wa majibu umeandaliwa kama inavyoonyeshwa kwenye jedwali lifuatalo:
| Vipengele | N inayohudumia (mfumo wa 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18µl × N |
| Suluhisho la majibu ya RT-PCR | 2µl × N |
| *N = idadi ya sampuli zilizojaribiwa + 1 (udhibiti hasi) + 1 (nCOVudhibiti mzuri) | |
2.2 Baada ya kuchanganya vipengele vizuri, weka katikati kwa muda mfupi ili kuruhusu kioevu chote kwenye ukuta wa bomba kuanguka chini ya bomba, na kisha aliquot mfumo wa ukuzaji wa 20 µl kwenye bomba la PCR.
3 Sampuli (sehemu ya maandalizi ya sampuli)
Ongeza 5μl ya udhibiti hasi na chanya baada ya uchimbaji.RNA ya sampuli ya kujaribiwa huongezwa kwenye bomba la majibu la PCR.
Funga bomba vizuri na uingilie kwa kasi ya 8,000 rpm kwa sekunde chache kabla ya kuihamisha hadi kwenye eneo la utambuzi wa ukuzaji.
Ukuzaji wa PCR 4 (eneo la utambuzi lililokuzwa)
4.1 Weka bomba la majibu kwenye sampuli ya seli ya chombo, na weka vigezo kama ifuatavyo:
| jukwaa | Mzunguko nambari | Halijoto(°C) | Muda | mkusanyikotovuti |
| Reverseunukuzi | 1 | 42 | Dakika 10 | - |
| Kabla ya denaturation | 1 | 95 | Dakika 1 | - |
| Mzunguko | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | ukusanyaji wa data |
Uteuzi wa kituo cha utambuzi wa ala: Chagua chaneli ya FAM、HEX、CY5 kwa mawimbi ya fluorescence.Kwa rejeleo la fluorescent HAKUNA, tafadhali usichague ROX.
5 Uchanganuzi wa matokeo (Tafadhali rejelea maagizo ya majaribio ya kila chombo kwa kuweka)
Baada ya majibu, hifadhi matokeo.Baada ya uchanganuzi, rekebisha thamani ya kuanzia, thamani ya kumalizia, na thamani ya kizingiti cha msingi kulingana na picha (mtumiaji anaweza kurekebisha kulingana na hali halisi, thamani ya kuanzia inaweza kuweka 3~15, thamani ya kumalizia inaweza kuwekwa 5 ~ 20, marekebisho) katika grafu ya logarithmic Katika kizingiti cha dirisha, mstari wa kizingiti ni katika awamu ya logarithmic, na curve ya amplification ya udhibiti hasi ni mstari wa moja kwa moja au chini ya mstari wa kizingiti).
6 Udhibiti wa kiasi (Udhibiti wa kiutaratibu umejumuishwa kwenye jaribio) Udhibiti hasi: Hakuna mseto dhahiri wa ukuzaji wa njia za utambuzi za FAM, HEX, CY5
Udhibiti chanya wa COV: mkondo wa ukuzaji wa wazi wa njia za kugundua za FAM na HEX, thamani ya Ct≤32, lakini hakuna mkunjo wa ukuzaji wa chaneli ya CY5;
Mahitaji ya hapo juu lazima yatimizwe wakati huo huo katika jaribio sawa;vinginevyo, jaribio ni batili na linahitaji kurudiwa.
7 Uamuzi wa matokeo.
7.1 Ikiwa hakuna curve ya ukuzaji au thamani ya Ct> 40 katika chaneli za FAM na HEX za sampuli ya jaribio, na kuna mteremko wa ukuzaji katika chaneli ya CY5, inaweza kuamuliwa kuwa hakuna coronavirus mpya ya 2019 (2019-nCoV) RNA katika sampuli;
.2 Iwapo sampuli ya jaribio ina mikunjo dhahiri ya ukuzaji katika chaneli za FAM na HEX, na thamani ya Ct ni ≤40, inaweza kuamuliwa kuwa sampuli hiyo ni nzuri kwa virusi vipya vya 2019 (2019-nCoV).
7.3 Iwapo sampuli ya jaribio ina mkunjo ulio wazi wa ukuzaji katika chaneli moja tu ya FAM au HEX, na thamani ya Ct ni ≤40, na hakuna kipinda cha ukuzaji katika mkondo mwingine, matokeo yanahitaji kufanyiwa majaribio tena.Ikiwa matokeo ya majaribio yanalingana, sampuli inaweza kuzingatiwa kuwa chanya kwa mpya
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Ikiwa matokeo ya majaribio tena ni hasi, inaweza kuamuliwa kuwa sampuli ni hasi kwa coronavirus mpya ya 2019 (2019-nCoV).
Thamani chanya ya hukumu
Mbinu ya curve ya ROC inatumika kubainisha thamani ya rejeleo ya CT ya kit na thamani ya marejeleo ya udhibiti wa ndani ni 40.
Ufafanuzi wa matokeo ya mtihani
1.Kila jaribio linapaswa kujaribiwa kwa vidhibiti hasi na vyema.Matokeo ya majaribio yanaweza tu kubainishwa wakati vidhibiti vinakidhi mahitaji ya udhibiti wa ubora
2.Wakati njia za kutambua FAM na HEX ni chanya, matokeo kutoka kwa chaneli ya CY5 (chaneli ya udhibiti wa ndani) inaweza kuwa mbaya kutokana na ushindani wa mfumo.
3.Wakati matokeo ya udhibiti wa ndani ni hasi, ikiwa tthe test tube za FAM na HEX za ugunduzi pia ni hasi, , inamaanisha kuwa mfumo umezimwa au operesheni si sahihi, t jaribio ni batili.Kwa hivyo, sampuli zinahitaji kupimwa tena.
